RU2410437C1 - Способ определения бактериостатического, бактерицидного и стимулирующего действия антибиотика на микроорганизмы - Google Patents
Способ определения бактериостатического, бактерицидного и стимулирующего действия антибиотика на микроорганизмы Download PDFInfo
- Publication number
- RU2410437C1 RU2410437C1 RU2009143513/10A RU2009143513A RU2410437C1 RU 2410437 C1 RU2410437 C1 RU 2410437C1 RU 2009143513/10 A RU2009143513/10 A RU 2009143513/10A RU 2009143513 A RU2009143513 A RU 2009143513A RU 2410437 C1 RU2410437 C1 RU 2410437C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- antibiotic
- effect
- bactericidal
- bacteriostatic
- microorganisms
- Prior art date
Links
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 title claims abstract description 33
- 244000005700 microbiome Species 0.000 title claims abstract description 23
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 22
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 title claims abstract description 16
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 title claims abstract description 14
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 title claims abstract description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 20
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims abstract description 15
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 8
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 claims abstract description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims abstract description 4
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 8
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 6
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 6
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 abstract description 3
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 abstract 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 abstract 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract 1
- 238000011158 quantitative evaluation Methods 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 11
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 10
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 9
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 9
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 9
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 9
- 229960000484 ceftazidime Drugs 0.000 description 8
- NMVPEQXCMGEDNH-TZVUEUGBSA-N ceftazidime pentahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.S([C@@H]1[C@@H](C(N1C=1C([O-])=O)=O)NC(=O)\C(=N/OC(C)(C)C(O)=O)C=2N=C(N)SC=2)CC=1C[N+]1=CC=CC=C1 NMVPEQXCMGEDNH-TZVUEUGBSA-N 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 6
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 6
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 6
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 6
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 4
- 241000588915 Klebsiella aerogenes Species 0.000 description 3
- 229940092559 enterobacter aerogenes Drugs 0.000 description 3
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 3
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 241000588626 Acinetobacter baumannii Species 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 238000002828 disc diffusion antibiotic sensitivity testing Methods 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 241000193755 Bacillus cereus Species 0.000 description 1
- 241000186245 Corynebacterium xerosis Species 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 241000194031 Enterococcus faecium Species 0.000 description 1
- 241000588748 Klebsiella Species 0.000 description 1
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 239000012984 antibiotic solution Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Способ определения бактериостатического, бактерицидного и стимулирующего действия антибиотика на микроорганизмы включает приготовление разведений исследуемого антибиотика в питательной среде и регистрацию наличия роста микроорганизмов. Определение можно проводить на 50 испытуемых микроорганизмах, одновременно нанесенных на поверхность твердой питательной среды (ПА) с разными концентрациями антибиотиков. После инкубирования посевов измеряют диаметр выросших колоний исследуемых культур, сравнивают их диаметр с контрольными посевами и определяют действие антибиотика как бактерицидное, бактериостатическое или стимулирующее при достоверном увеличении или снижении диаметра колоний по сравнению с контролем. Изобретение позволяет повысить точность качественной и количественной оценки бактериостатического, бактерицидного и стимулирующего действия антибиотика на микроорганизмы. 3 ил., 2 табл.
Description
Изобретение относится к медицине, микробиологии, а именно к бактериологии и относится к способам определения действия антибиотика на микроорганизмы.
Известен способ определения чувствительности микроба к антибиотику [РФ, п. 2121678, МПК7 G01N 33/48, А61К 38/19, C12Q 1/18, опубл. 10.11.1998 г.], включающий сравнение зон задержек роста исследуемого микроорганизма после контакта с бумажным диском с ампициллином с одной стороны и диском совместно с цитокином с другой стороны чашки Петри.
Недостатки способа заключаются в том, что единовременно может исследоваться только одна культура и данный способ не предусматривает количественного учета результатов. Отсутствуют контрольные данные.
Наиболее близким к заявляемому изобретению является способ определения бактериостатического и бактерицидного действия антибиотика [РФ, п. 2213780, МПК 7 C12Q 1/04, C12N 1/20, опубл. 10.10.2003 г., (прототип)], включающий разведение исследуемого антибиотика в питательной среде с индикатором и добавление в эту среду суспензии бактерий. О бактерицидном и бактериостатическом действии антибиотика в данном способе судят по отсутствию или наличию помутнения и изменению цвета среды в планшете.
Недостатками способа являются недостаточная точность регистрируемых результатов, так как учет проводится визуально. Определение действия антибиотика на микроорганизм требует проведения нескольких учетов результатов и дополнительных затрат на реагенты. В способе-прототипе невозможно определение стимулирующего действия антибиотика на микроорганизм.
Техническим результатом изобретения является повышение точности качественной и количественной оценки бактериостатического, бактерицидного и стимулирующего действия антибиотика на микроорганизмы.
Технический результат достигается тем, что в способе определения бактериостатического, бактерицидного и стимулирующего действия антибиотика на микроорганизмы, включающем приготовление разведений исследуемого антибиотика в питательной среде и регистрацию наличия роста микроорганизмов, новым является то, что используют 50 разных культур микроорганизмов, одновременно нанесенных на поверхность твердой питательной среды (ПА) с разными концентрациями антибиотиков, измеряют диаметр выросших колоний исследуемых микроорганизмов и определяют действие антибиотика как бактерицидное, бактериостатическое или стимулирующее при достоверном увеличении или снижении диаметра колоний по сравнению с контролем.
Заявляемый способ использует 50 разных культур микроорганизмов, одновременно нанесенных на поверхность твердой питательной среды (ПА) с разными концентрациями антибиотиков, позволяет дать количественную оценку действию антибиотика на исследуемые культуры, все это дает возможность статистической обработки результатов и, следовательно, повышает точность и достоверность получаемых результатов.
Это отличие позволяет сделать вывод о соответствии заявляемого технического решения критерию «новизна».
Признаки, отличающие заявляемое техническое решение от прототипа, не выявлены в других технических решениях при изучении данной и смежных областей техники и, следовательно, обеспечивают заявляемому решению соответствие критерию «изобретательский уровень».
Сущность изобретения поясняется чертежами:
На фиг.1 представлено действие разных концентраций гентамицина на рост исследуемых бактерий, где 1 - контроль; 2, 3 и 4 - концентрации антибиотика: 40, 120 и 240 мкг/мл. На фиг.2 представлено действие антибиотиков дискодиффузным методом на Staphylococcus aureus 206. На фиг.3 представлено действие разных концентраций цефтазидима на рост исследуемых бактерий, где 1 - контроль; 2, 3 и 4 - концентрации антибиотика: 10, 30 и 100 мкг/мл.
Предлагаемый способ выполняется в три этапа, исследование проводят в чашках Петри.
Первый этап - в пробирках со стерильным физиологическим раствором готовят разведения антибиотика в трех разных концентрациях. В пептонный агар (1% пептона, 0,5% NaCl на дистиллированной воде с 2%-ным агаром, рН 7,4), предварительно остуженный до 40°С, добавляют приготовленный ранее раствор антибиотика. Среду перемешивают и мерно (по 30 мл) разливают по чашкам Петри. Разное количество среды в чашках может исказить получаемые результаты.
Второй этап - стерилизуют ручку и станину репликатора. Из суточных испытуемых культур по оптическому стандарту мутности на 10 единиц на стерильном 0,9%-ном растворе хлорида натрия готовят суспензию, которой пастеровскими пипетками заполняют лунки станины репликатора. Затем с помощью репликатора делают реплики (Miller, 1972) до 50 исследуемых культур одновременно на поверхность незасеянной среды с антибиотиком. Параллельно с опытом ставят контроль. Контролем служат чашки с пептонным агаром, не содержащим антибиотик, засеянными теми же испытуемыми микроорганизмами. Опытные и контрольные чашки с испытуемыми культурами в течение 18 часов инкубируют в термостате при 37°С.
Третий этап - оценивают реакции исследуемых культур на действие антибиотика путем измерения и сравнения диаметров колоний в опыте и контроле. Проводят статистическую обработку результатов. Действие антибиотика на микроорганизмы определяют как бактерицидное, бактериостатическое или стимулирующее при достоверном увеличении или снижении диаметра колоний по сравнению с контролем.
Пример 1. Определение действия гентамицина на бактерии, предоставленные бак. лабораторией Городской клинической больницы №6 им. Н.С.Карповича (бывшая ГБСМП) г.Красноярска.
В эксперименте испытуемыми культурами были бактериальные штаммы: Bacillus cereus 262, Acinetobacter baumanii 190, Escherichia coli 247, Enterobacter aerogenes 264, Klebsiella pneumonii 181, Providenciae rettgeri 257, Pseudomonas aeruginosa 202, Pseudomonas aeruginosa 190, Corynebacterium xerosis 313, Enterococcus faecium 263, Staphylococcus aureus 206, Staphylococcus aureus 179. В качестве питательной среды использовали пептонный агар. Гентамицин брали в виде 4% раствора в ампулах. Готовили разведения антибиотика в физиологическом растворе в трех концентрациях - 40, 120 и 240 мкг/мл. Для последующего сравнения полученных результатов с известным дискодиффузным методом одну из концентраций (120 мкг/мл) брали равной концентрации гентамицина в бумажном диске. Приготовленные растворы добавляли в чашки Петри с предварительно остуженным до 40°С пептонным агаром. Из суточных испытуемых культур по оптическому стандарту мутности на 10 единиц на стерильном физиологическом растворе готовили суспензию. Приготовленной суспензией заполняли лунки станины репликатора и с помощью репликатора делали реплики испытуемых культур в трех повторностях на поверхность питательной среды с антибиотиком (опыт). Параллельно с опытными чашками делали реплики исследуемых культур на поверхность питательной среды без антибиотика (контроль). Далее в течение 18 часов культуры инкубировали в термостате при 37°С. Затем проводили оценку полученных результатов: измеряли и сравнивали диаметры колоний в опыте и контроле (фиг.1), проводили статистическую обработку данных. Учитывали в опыте и контроле среднюю арифметическую величину измерений диаметра колоний, ошибку средней арифметической и достоверность сравнения полученных результатов. В таблице 1 представлены результаты сравнения диаметра колоний (в мм) исследуемых бактерий в опыте (при действии гентамицина) и контроле (без гентамицина).
Результаты, полученные заявляемым способом, сравнили с результатами по определению действия гентамицина на бактерии диско-диффузным методом. Для этого суспензией исследуемых бактерий засевали чашку Петри с пептонным агаром и раскладывали диски, пропитанные антибиотиками (фиг.2). Далее в течение 18 часов культуры инкубировали в термостате при 37°С. Результаты учитывали путем измерения диаметров зон задержки роста в опыте и контроле. В таблице 1 дан диаметр зон задержки роста (мм) испытуемых культур при использовании дискодиффузного метода.
При сравнении действия гентамицина на рост исследуемых бактерий предлагаемым способом с дискодиффузным выявлено, что действия совпали в четырех случаях. В одном случае выявлено достоверное бактерицидное действие гентамицина на рост Acinetobacter baumanii 190. В трех случаях действие отсутствовало (Enterobacter aerogenes 264, Providenciae rettgeri 257, Pseudomonas aeruginosa 190). В остальных случаях результаты не совпали. Предлагаемым способом выявлено еще четыре достоверных бактерицидных действия и одно достоверное стимулирующее.
Пример 2. Определение действия цефтазидима на бактерии, предоставленные бак. лабораторией Городской клинической больницы №6 им. Н.С.Карповича (бывшая ГБСМП) г.Красноярска, по приведенной на примере 1 схеме. Цефтазидим брали в виде порошка. Готовили разведения антибиотика в физиологическом растворе в трех концентрациях - 10, 30 и 100 мкг/мл. Для последующего сравнения результатов двух методов одну из концентраций (30 мкг/мл) брали равной концентрации цефтазидима в бумажном диске. В таблице 2 представлены результаты сравнения диаметра колоний (в мм) исследуемых бактерий в опыте (при действии цефтазидима) и контроле (без цефтазидима).
При сравнении действия цефтазидима на рост исследуемых бактерий предлагаемым способом с дискодиффузным выявлено, что действия совпали в четырех случаях. В одном случае выявлено достоверное бактерицидное действие цефтазидима на рост Corynebacterium xerosis 313. В трех случаях действие отсутствовало (Escherichia coli 247, Enterobacter aerogenes 264, Enterococcus faecium 263). В остальных случаях результаты не совпали. Предлагаемым способом выявлено еще пять достоверных бактерицидных действий и два достоверных стимулирующих.
Заявляемый способ позволяет дать количественную оценку действия антибиотика на исследуемые культуры. Оценка проводится путем измерения диаметра колоний испытуемых микроорганизмов в опыте и контроле с последующей статистической обработкой данных. Способ позволяет выявить не только бактериостатическое и бактерицидное действие антибиотика на микроорганизм, но и стимулирующее действие. Результаты могут быть выражены как в абсолютных, так и относительных величинах. Данным способом возможно изучение действия антибиотика на 50 исследуемых культур одновременно.
Claims (1)
- Способ определения бактериостатического, бактерицидного и стимулирующего действия антибиотика на микроорганизмы, включающий приготовление разведений исследуемого антибиотика в питательной среде и регистрацию наличия роста микроорганизмов, отличающийся тем, что используют 50 разных испытуемых микроорганизмов, одновременно нанесенных репликатором на поверхность твердой питательной среды (ПА) с разными концентрациями антибиотиков, измеряют диаметр выросших колоний исследуемых микроорганизмов и определяют действие антибиотика как бактерицидное, бактериостатическое или стимулирующее при достоверном увеличении или снижении диаметра колоний по сравнению с контролем.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2009143513/10A RU2410437C1 (ru) | 2009-11-24 | 2009-11-24 | Способ определения бактериостатического, бактерицидного и стимулирующего действия антибиотика на микроорганизмы |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2009143513/10A RU2410437C1 (ru) | 2009-11-24 | 2009-11-24 | Способ определения бактериостатического, бактерицидного и стимулирующего действия антибиотика на микроорганизмы |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2410437C1 true RU2410437C1 (ru) | 2011-01-27 |
Family
ID=46308417
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2009143513/10A RU2410437C1 (ru) | 2009-11-24 | 2009-11-24 | Способ определения бактериостатического, бактерицидного и стимулирующего действия антибиотика на микроорганизмы |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2410437C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108485953A (zh) * | 2018-04-23 | 2018-09-04 | 莱茵技术（上海）有限公司 | 一种细菌培养装置及用于口含烟抑菌性能测试的方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2117293C1 (ru) * | 1996-07-09 | 1998-08-10 | Пермская государственная медицинская академия | Способ подбора антисептиков для лечения гнойных ран |
| RU97118043A (ru) * | 1997-10-21 | 1999-08-10 | Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт | Способ фаготипирования бактериальных культур |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2137838C1 (ru) * | 1997-10-21 | 1999-09-20 | Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт | Способ фаготипирования бактериальных культур |
-
2009
- 2009-11-24 RU RU2009143513/10A patent/RU2410437C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2117293C1 (ru) * | 1996-07-09 | 1998-08-10 | Пермская государственная медицинская академия | Способ подбора антисептиков для лечения гнойных ран |
| RU97118043A (ru) * | 1997-10-21 | 1999-08-10 | Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт | Способ фаготипирования бактериальных культур |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108485953A (zh) * | 2018-04-23 | 2018-09-04 | 莱茵技术（上海）有限公司 | 一种细菌培养装置及用于口含烟抑菌性能测试的方法 |
| CN108485953B (zh) * | 2018-04-23 | 2023-08-01 | 上海新型烟草制品研究院有限公司 | 一种细菌培养装置及用于口含烟抑菌性能测试的方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US10696999B2 (en) | Rapid method for detection of Salmonella live vaccine strains | |
| US20220243248A1 (en) | Method for the rapid determination of susceptibility or resistance of bacteria to antibiotics | |
| Olofsson et al. | N-acetyl-L-cysteine affects growth, extracellular polysaccharide production, and bacterial biofilm formation on solid surfaces | |
| de Breij et al. | Three-dimensional human skin equivalent as a tool to study Acinetobacter baumannii colonization | |
| US20080166753A1 (en) | Microbial Growth Assay | |
| Slade et al. | An in vitro collagen perfusion wound biofilm model; with applications for antimicrobial studies and microbial metabolomics | |
| Bharti et al. | Heat stable antimicrobial activity of Burkholderia gladioli OR1 against clinical drug resistant isolates | |
| RU2410437C1 (ru) | Способ определения бактериостатического, бактерицидного и стимулирующего действия антибиотика на микроорганизмы | |
| RU2319746C2 (ru) | Способ ускоренного определения чувствительности буркхольдерий к химиопрепаратам | |
| Workman et al. | Activity of penicillinase in Staphylococcus aureus as studied by the iodometric method | |
| CN110117531B (zh) | 耐药表型快速检测药敏平板及耐药表型快速检测方法 | |
| US8911962B2 (en) | Method for neutralization of antibiotics in a culture medium | |
| Mohsien et al. | Virulance factors enhancing microbial infection in chronic osteomylitis and antibiotic susceptability pattern | |
| Almosa et al. | Biofilm formation by clinical Acinetobacter Baumannii strains and its effect on antibiotic resistance | |
| Bitew et al. | Meso-tartrate inhibits intracellular replication of Coxiella burnetii, the causative agent of the zoonotic disease Q fever | |
| Mustafa et al. | Application of Silver Oxide Nanoparticles as Antibiofilm and Detection of Beta Lactamase Gene in Escherichia Coli Isolated from Diabetic Mellitus Patients | |
| RU2666257C1 (ru) | Способ определения чувствительности бактериальных гемокультур к антибиотикам | |
| RU2752895C1 (ru) | Штамм бактерий salmonella enterica vgnki-11 (вкшм-б-848м) в качестве контрольного штамма для фенотипических и молекулярных исследований в диагностике сальмонеллёза | |
| Sismaet | Development and Optimization of Electrochemical Sensors to Detect Bacterial Pathogens for Point-Of-Care Applications | |
| RU2192642C2 (ru) | Способ прогнозирования клинической эффективности антибактериального средства | |
| RU2603085C1 (ru) | Дифференциально-диагностическая питательная среда для определения порин-зависимых механизмов устойчивости бактерий pseudomonas aeruginosa к бета-лактамным антибиотикам | |
| Jaber et al. | Antibiotic susceptibility of Proteus Mirabillis that isolates of Diabetic foot ulcers in Al-Diwaniyah Hospital | |
| WO2024083429A1 (en) | Treatment of microbial infections diagnosed using the biomarker d-lactate | |
| RU2518372C1 (ru) | СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ МИКРООРГАНИЗМОВ РОДА Salmonella К АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫМ ПРЕПАРАТАМ | |
| Bibi et al. | Isolation, identification and antimicrobial analysis of Pseudomonas aeruginosa from different clinical samples and to study the interactions of target and resistant proteins with cefepime and imipenem through docking |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20121125 |