EP2306203B1 - Diagnose und Risikostratifizierung mittels NT-proET-1 - Google Patents

Diagnose und Risikostratifizierung mittels NT-proET-1 Download PDF

Info

Publication number
EP2306203B1
EP2306203B1 EP10191423A EP10191423A EP2306203B1 EP 2306203 B1 EP2306203 B1 EP 2306203B1 EP 10191423 A EP10191423 A EP 10191423A EP 10191423 A EP10191423 A EP 10191423A EP 2306203 B1 EP2306203 B1 EP 2306203B1
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
pro
diagnosis
diseases
seq
respiratory tract
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
EP10191423A
Other languages
English (en)
French (fr)
Other versions
EP2306203A1 (de
Inventor
Andreas Bergmann
Joachim Struck
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
BRAHMS GmbH
Original Assignee
BRAHMS GmbH
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by BRAHMS GmbH filed Critical BRAHMS GmbH
Publication of EP2306203A1 publication Critical patent/EP2306203A1/de
Application granted granted Critical
Publication of EP2306203B1 publication Critical patent/EP2306203B1/de
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/575—Hormones
    • G01N2333/5754—Endothelin, vasoactive intestinal contractor [VIC]
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/12—Pulmonary diseases
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/12—Pulmonary diseases
    • G01N2800/122—Chronic or obstructive airway disorders, e.g. asthma COPD
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/32—Cardiovascular disorders
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/32—Cardiovascular disorders
    • G01N2800/324—Coronary artery diseases, e.g. angina pectoris, myocardial infarction
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/50—Determining the risk of developing a disease
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis

Definitions

  • the invention relates to a method for the diagnosis and / or risk stratification of respiratory and lung diseases, wherein a determination of the free fragment N-terminal pro-endothelin (NT-proET-1; AS 18-52 of the preproET according to FIG. 1 ) or fragments thereof.
  • NT-proET-1 free fragment N-terminal pro-endothelin
  • C-terminal ProEndothelin fragments (CTproET-1) with the amino acid sequences 93-212 or 168-212 of preproEndothelin ( FIG. 1 , SEQ ID no. 1) for the diagnosis of cardiovascular diseases for the indirect determination of endothelin-1 or the big endothelin-1 content in EP 1564558 B1 described.
  • a disadvantage of the known diagnostic methods using the previously known markers is that an early and complete detection of high-risk patients is not sufficiently successful and therefore risk stratification does not take place sufficiently. It is therefore an object of the invention to develop a method for the risk stratification of heart diseases as well as diseases of the respiratory tract and lungs, which enables an improved detection of risk patients.
  • Another object is, therefore, a method for risk stratification of diseases airway and lung, wherein at least one marker or combination of markers has sufficient sensitivity and specificity in an in vitro diagnosis.
  • the object is achieved by a method for the diagnosis and risk stratification of respiratory and pulmonary diseases, wherein a determination of the N-terminal proEndothelin (in short: "NT-proET-1") or fragments and partial peptides thereof, takes place (method according to the invention).
  • NT-proET-1 N-terminal proEndothelin
  • NT-proET-1 or fragments and partial peptides thereof have high sensitivity and specificity for the diagnosis of respiratory and lung diseases (see Examples and Figures).
  • lung and respiratory tract infections namely those caused by bacteria, viruses, fungi or parasites, e.g. such indications as lower respiratory tract infections (LRTI), bronchitis, pneumonia, sarcoidosis, bronchiectasis, non-cardiac pulmonary edema.
  • LRTI lower respiratory tract infections
  • bronchitis pneumonia
  • sarcoidosis bronchiectasis
  • non-cardiac pulmonary edema non-cardiac pulmonary edema.
  • LRTI deep respiratory tract infections
  • bronchitis bronchitis
  • putrid bronchitis preferably bronchitis
  • pneumonia preferably a chronic respiratory tract infection (LRTI)
  • CAP community-acquired pneumonia
  • LRTI deep respiratory tract infections
  • pneumonia is understood as meaning an acute or chronic disease of the lung tissue and its infection is caused by bacteria, viruses or fungi, parasites, rarely also toxic by inhalation of toxic substances or immunologically.
  • pneumonia is a constellation of various symptoms (fever or hypothermia, chills, coughing, pleuritic thoracic pain, increased sputum production, increased respiratory rate, knocking sound attenuation, bronchial breathing, near the ear Rattle sounds, pleural discs) in combination with at least one infiltrate recognizable on the chest X-ray image ( Harrison's Internal Medicine, edited by Manfred Dietel, Norbert Suttorp and Martin Zeitz, ABWijnsverlag 2005 ).
  • respiratory and lungs disorders are understood to mean, in particular, “chronic lung and respiratory diseases”, such as interstitial lung diseases and pulmonary fibrosis, chronic obstructive pulmonary diseases (COPD), in particular COPD infection exacerbations, bronchial asthma , especially infectious exacerbations in bronchial asthma, bronchogenic carcinoma.
  • COPD chronic obstructive pulmonary diseases
  • bronchial asthma especially infectious exacerbations in bronchial asthma, bronchogenic carcinoma.
  • COPD especially COPD infection exacerbations.
  • COPD denotes a group of chronic diseases characterized by coughing, increased expectoration and respiratory distress during exercise.
  • chronic obstructive bronchitis and pulmonary emphysema should be mentioned. Both diseases are characterized in that above all the exhalation (expiration) is obstructed.
  • a colloquial term for the main symptom of COPD is also "smoker's cough".
  • the invention is particular beneficial in acute exacerbations.
  • the term "risk stratification” encompasses the finding of patients, in particular emergency patients and risk patients, with the worse prognosis, for the purpose of more intensive diagnostics and therapy / treatment of respiratory and lungs diseases, in particular infections and chronic inflammations, with the aim of achieving the most favorable course possible To enable illness.
  • a risk stratification according to the invention consequently allows an effective treatment process for the treatment or therapy of infections or chronic diseases of the respiratory and lungs by means of antibiotics.
  • the invention also relates to the identification of patients at increased risk and / or an unfavorable prognosis of respiratory and lung diseases in symptomatic and / or asymptomatic patients, especially emergency patients.
  • a secure stratification can take place particularly advantageously by means of the method according to the invention.
  • the method according to the invention therefore makes possible clinical decisions which lead to rapid therapeutic success and to the avoidance of death. Such clinical decisions also include continuing treatment with drugs for the treatment or treatment of respiratory and pulmonary diseases.
  • the invention also relates to a method for diagnosing and / or risk stratifying patients of respiratory and pulmonary diseases to make clinical decisions, such as continuing treatment and therapy with drugs, preferably in time-critical intensive care or emergency medicine, including the decision to hospitalize the patient.
  • the method according to the invention therefore relates to the therapy control of respiratory diseases.
  • the diagnosis and / or risk stratification for prognosis the differential diagnostic early detection and detection, the assessment of the degree of severity and the therapy-accompanying course assessment.
  • the invention relates to a method for in-vitro diagnostics for the early or differential diagnosis or prognosis of respiratory and lung diseases, wherein a determination of the marker NT-proET-1 or fragments and partial peptides thereof, on a patient to be examined is carried out.
  • body fluid preferably blood
  • body fluid is taken from the patient to be examined, optionally whole blood or serum or available plasma, and the diagnosis is made in vitro / ex vivo, ie outside the human or animal body. Due to the determination of the marker NT-proET-1 or fragments and partial peptides thereof, a high sensitivity and specificity is achieved (see examples and figures) and based on the amount present in at least one patient sample the diagnosis or risk stratification can take place.
  • NT-proET-1 is understood as meaning a human protein or polypeptide which can be obtained from the preproendothelin and is used in the context of the preproendothelin (SEQ ID No.1 and FIG. 1 ) comprising free fragments with amino acids 18-52 and the fragments APETAVLGAELSAV (SEQ ID No. 2) pos. 18-31 of preproET-1 (SEQ ID Nos. 1 and FIG. 1 ) and GENGGEKPTPSPPWRLRRSKR (SEQ ID NO: 3) pos. 32-52 of preproET-1 (SEQ ID NOs FIG. 1 ).
  • these polypeptides of the invention may have post-translational modifications, such as glycosylation, lipid (o) identification, or derivatizations.
  • NT-proET-1 or fragments and partial peptides thereof may be in addition to other markers, preferably those already indicating respiratory and pulmonary diseases.
  • the invention therefore relates to such an embodiment of the method according to the invention, wherein the determination is additionally carried out with at least one further marker selected from the group of inflammatory markers, cardiovascular markers, neurohormonal markers or ischemic markers on a patient to be examined.
  • the inflammatory marker may comprise at least one of C-reactive protein (CRP), cytokines such as TNF-alpha, interleukins such as IL-6, procalcitonin (1-116, 3-116) and adhesion molecules such as VCAM or ICAM and the cardiovascular marker, in particular necrosis of myocardial tissue-indicating markers and blood pressure-influencing markers from at least one marker from the group creatine kinase, myoglobin, myeloperoxidase, natriuretic protein, in particular ANP (or ANF), proANP, NT proANP, BNP, proBNP, NT-proBNP or a subsequence thereof, cardiac troponin, CRP.
  • CRP C-reactive protein
  • cytokines such as TNF-alpha
  • interleukins such as IL-6
  • procalcitonin (1-116, 3-116) procalcitonin (1-116, 3-116
  • adhesion molecules such as VCAM or ICAM
  • the cardiovascular marker
  • pro-gastrin-releasing peptide proGRP
  • pro-endothelin-2 pro-endothelin-3
  • pro-leptin pro-neuropeptide-Y
  • pro-somatostatin pro Neuropeptide YY
  • pro-opio mandelanocortin pro-adrenomedullin
  • proADM pro-vasopressin
  • proAVP pro-vasopressin
  • the ischemic marker can be selected from at least one marker from the group troponin I and T, CK-MB.
  • the neurohormonal marker may be at least one other natriuretic protein, in particular ANP (or ANF), proANP, NT-proANP, BNP, proBNP or in each case a partial sequence thereof.
  • the method of the invention may be carried out as part of an in vitro diagnosis by means of parallel or simultaneous determinations of the markers (e.g., 96 and more well multi-well plates), with determinations being made on at least one patient sample.
  • the markers e.g., 96 and more well multi-well plates
  • inventive method and its provisions in a diagnostic device based on a Automatic analyzers in particular by means of a cryptor (http://www.kryptor.net/) are performed.
  • the method according to the invention and its determinations can be carried out by means of a rapid test (for example, lateral-flow test or point-of-care), whether in single or multiparameter determination.
  • a rapid test for example, lateral-flow test or point-of-care
  • it is a self-test or a device that is suitable in emergency diagnostics.
  • the invention relates to the use of NT-proET-1 or fragments thereof, for the risk stratification of respiratory and lung diseases and / or for in-vitro diagnostics for the early or differential diagnosis or prognosis of respiratory and lung diseases.
  • Another object is the use of a corresponding diagnostic device for carrying out the method according to the invention.
  • an array or assay understood eg, immunoassay, ELISA, etc.
  • an apparatus for performing the method according to the invention e.g, an array or assay understood (eg, immunoassay, ELISA, etc.), in the broadest sense, an apparatus for performing the method according to the invention.
  • the invention further relates to the use of a kit for the diagnosis and / or risk stratification of respiratory and lung diseases, containing detection reagents for the determination of NT-proET-1 or fragments thereof, if necessary.
  • detection reagents include e.g. Antibodies etc.
  • the peptide-specific antibodies were prepared from the antisera obtained from the fourth month after the immunization.
  • the peptides PAV15 and MPGC22 were first coupled to SulfoLink gel (see working instructions "SulfoLink Kit” from PIERCE, Rockford, IL, USA). In each case, 5 mg of peptide per 5 ml of gel were offered for coupling.
  • NAP-5 gel filtration columns 500 ⁇ l of the purified anti-MPGC22 antibody so) were buffered in 1 ml of 100 mM potassium phosphate buffer (pH 8.0) according to the instructions. The protein concentrations of the antibody solution were adjusted to 1.5 mg / ml with 100 mM potassium phosphate buffer (pH 8.0).
  • the antibody was further treated as follows: 67 ⁇ l of the antibody solution were admixed with 10 ⁇ l of MA70-acridinium-NHS ester (1 mg / ml, from HOECHST Behring) and incubated for 15 minutes at room temperature. Then, 423 ⁇ l of 1 M glycine was added and incubated for a further 10 minutes. Subsequently, the labeling anchor was rebuffered via a NAP-5 gel filtration column (Pharmacia) in 1 ml of eluent A (50 mM potassium phosphate, 100 mM NaCl, pH 7.4) according to the instructions, and freed from low molecular weight constituents.
  • eluent A 50 mM potassium phosphate, 100 mM NaCl, pH 7.4
  • Irradiated 5 ml polystyrene tubes were with The anti-PAV15 antibody was coated as follows: The antibody was diluted in 50 mM Tris, 100 mM NaCl, pH 7.8 to a concentration of 6.6 ⁇ g / ml. 300 ⁇ l of this solution were pipetted into each tube. The tubes were incubated at 22 ° C for 20 hours. The solution was sucked off. Then, each tube was filled with 4.2 ml of 10 mM sodium phosphate, 2% Karion FP, 0.3% Bovine Serum Albumin, pH 6.5. After 20 hours, the solution was filtered with suction. Finally, the tubes were dried in a vacuum dryer.
  • the standard material was peptide PAR35, which was serially diluted in normal horse serum (SIGMA). Concentrations according to the Peptideinwaage were attributed to the standards thus prepared.
  • the sandwich immunoassay was set up as follows: Into the respective antibody-coated test tubes, 50 ⁇ l of standards or samples and 200 ⁇ l of assay buffer (100 mM sodium phosphate, 150 mM NaCl, 5% Bovine Serum Albumin, 0.1% unspecified sheep IgG, 0.1% sodium Azide, pH 7.4) containing 1 million RLU (relative light units) of MA70-labeled antibody, pipetted. It was incubated for 2 hours at 22 ° C with shaking.
  • assay buffer 100 mM sodium phosphate, 150 mM NaCl, 5% Bovine Serum Albumin, 0.1% unspecified sheep IgG, 0.1% sodium Azide, pH 7.4
  • NT-proET-1 N-terminal pro-endothelin-1
  • Clinical value (examples that refer to patients with heart disease are for reference).
  • NT-proET-1 concentrations were measured in patients with chronic or acutely decompensated heart failure. NT-proET-1 concentrations were associated with severity of heart failure, especially with increased severity: the median NT-proET-1 concentrations in the four severity categories NYHA I-IV were: 35.4, 37.3, 45, 5 and 83.9 pmol / L (s. Fig. 2 ).
  • NT-proET-1 levels were determined from a group of 316 patients with chronic heart failure and 200 healthy controls.
  • the receiver operator characteristic analysis yielded an AUC of 0.72.
  • the sensitivity was 34.3% with a specificity of 98%.
  • the sensitivity was 38.5% with a specificity of 95%.
  • NT-proET-1 levels were determined. Patients were followed for a median of 360 days. In this period 42 patients died, 274 survived. Receiver-Operator-Characteristics analysis determined the best cut-off value (defined as the largest product of sensitivity and specificity) for predicting mortality: 51.3 pmol / L. At this cut-off value, the sensitivity of the prognosis was 71.4%, the specificity was 74.5%. The likelihood ratio died at a cut-off value of 51.3 pmol / L: 2.8. ⁇ 51.3 pmol / L > 51.3 pmol / L survivor 204 70 dead 12 30
  • NT-proET-1 levels were determined. Of the 125 patients, 69 had heart failure.
  • the receiver operator characteristic analysis for the differential diagnosis of heart failure revealed an AUC of 0.72. At a cut-off value of 111 pmol / L, the sensitivity was 10.2% with a specificity of 98%. At a cut-off value of 90.5 pmol / L, the sensitivity was 17.5% with a specificity of 95%.
  • NT-proET-1 levels were determined from a group of 69 patients with acutely decompensated heart failure. Patients were followed for 360 days. In this period, 21 patients died, 48 survived. Receiver-Operator-Characteristics analysis determined the best cut-off value (defined as the largest product of sensitivity and specificity) for predicting mortality: 64 pmol / L. At this cut-off value, the sensitivity was Prognosis 66.6%, the specificity was 68.7%. The likelihood ratio of dying was 64 pmol / L: 2.0. ⁇ 64 pmol / L > 64 pmol / L survivor 33 15 dead 7 14
  • NT-proET-1 concentrations increased with the PSI (Pneumonia Severity Index), a severity score ( FIG. 3 ) and were median at 53 pmol / L compared to healthy controls (30.5 pmol / L).
  • PSI Pneumonia Severity Index
  • FIG. 3 the receiver-operator-characteristics analysis yielded an AUC of 0.89.
  • Receiver-Operator-Characteristics analysis determined the best cut-off value (defined as the largest product of sensitivity and specificity) for predicting mortality: 77 pmol / L.
  • NT-proET-1 was measured. With a median of 47 pmol / L, these patients were elevated compared to healthy controls (30.5 pmol / L), but were lower than pneumonia patients (see 53 pmol / L).

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Description

  • Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Diagnose und / oder Risikostratifizierung von Erkrankungen der Atemwege und Lunge, wobei eine Bestimmung des freien Fragment N-terminales proEndothelin (NT-proET-1; AS 18-52 des preproET gemäß Figur 1) oder Fragmenten davon, erfolgt.
  • Zwecks einer geeigneten Therapie, bedarf es einer frühen Diagnose und Differenzierung von Erkrankungen der Atemwege und Lunge bereits in der Notaufnahme in Verbindung mit der Notwendigkeit klinische Entscheidungen zu treffen.
  • Im Stand der Technik ist das reife ET-1 (21 AS) zur Diagnostik samt Vorläuferprotein Big-ET 1 (38AS, siehe Figur 1) beschrieben (Rossi GP, Seccia TM, Albertin G, Pessina AC. Measurement of endothelin: clinical and research use. Ann Clin Biochem 2000;37(Pt 5):608-26.2; Aubin P, Le Brun G, Moldovan F, Villette JM, Creminon C, Dumas J, et al. Sandwich-type enzyme immunoassay for big endothelin-I in plasma: concentrations in healthy human subjects unaffected by sex or posture. Clin Chem 1997;43: 64-70). Ferner ist bekannt, dass Endothelin-Prohormone zur Diagnose von Sepsis in WO 00/22439 bzw. EP 1121600 B1 der Anmelderin offenbart sind.
  • Ferner sind die C-terminalen ProEndothelin Fragmente (CTproET-1) mit den Aminosäuresequenzen 93-212 oder 168-212 des preproEndothelin (Figur 1, SEQ ID No. 1) zur Diagnose von Herz-Kreislauferkrankungen zur indirekten Bestimmung des Endothelin-1 oder des big - Endothelin-1 Gehaltes in EP 1564558 B1 beschrieben.
  • Nachteilig an den bekannten Diagnoseverfahren unter Verwendung der bisher bekannten Marker ist jedoch weiterhin, dass eine frühzeitige und vollständige Erfassung von Risikopatienten nicht ausreichend gelingt und daher eine Risikostratifizierung nicht ausreichend erfolgt. Eine der Erfindung zugrunde liegende Aufgabe besteht daher darin, ein Verfahren zur Risikostratifizierung von Herzerkrankungen sowie Erkrankungen der Atemwege und Lunge zu entwickeln, das eine verbesserte Erfassung von Risikopatienten ermöglicht.
  • Ferner ist nachteilig, dass im Stand der Technik zumeist keine hinreichende Sensitivität und/oder Spezifität der Marker erreicht wird.
  • Struck et al. (2005), Peptides, Vol. 26, Seiten 2482-2486 enthüllen die Messung des Vorläuferpeptids von Endothelin-1 in Plasma stellen aber keinen Zusammenhang des Peptids als Marker mit der Diagnose oder Stratifizierung von Lungenkrankheiten oder Erkrankungen der Atemwege her.
  • Eine weitere Aufgabe besteht daher darin, ein Verfahren zur Risikostratifizierung von Erkrankungen der Atemwege und Lunge bereitzustellen, wobei mindestens ein Marker oder eine Kombination von Markern eine hinreichende Sensitivität und Spezifität in einer in-vitro Diagnose aufweist.
  • Daher ist es Aufgabe der vorliegenden Erfindung ein Verfahren zur Diagnose und / oder Risikostratifizierung von Erkrankungen der Atemwege und Lunge bereitzustellen.
  • Die Aufgabe wird durch ein Verfahren zur Diagnose und Risikostratifizierung von Erkrankungen der Atemwege und Lunge gelöst, wobei eine Bestimmung des N-terminales proEndothelin (kurz: "NT-proET-1") oder Fragmenten und Teilpeptiden davon, erfolgt (nachstehend erfindungsgemäßes Verfahren).
  • Überraschender Weise weisen NT-proET-1 oder Fragmente und Teilpeptide davon, eine hohe Sensitivität und Spezifität für die Diagnose von Erkrankungen der Atemwege und Lunge auf (Siehe Beispiele und Figuren).
  • Im Rahmen dieser Erfindung wird unter "Erkrankungen der Atemwege und der Lunge" insbesondere "Infektionen der Lunge und Atemwege" und zwar solche Infektionen verstanden, die durch Bakterien, Viren, Pilze oder Parasiten verursacht werden, z.B. solche Indikationen wie tiefe Atemwegsinfektion (LRTI: Lower respiratory tract infections), Bronchitis, Pneumonie, Sarkoidose, Bronchiektasen, Nicht-kardiales Lungenödem.
  • Erfindungsgemäß bevorzugt sind zudem tiefe Atemwegsinfektion (LRTI: Lower respiratory tract infections), Bronchitis, putride Bronchitis, Pneumonie. Ganz besonders bevorzugt ist Pneumonie, insbesondere die ambulant erworbene Pneumonie (CAP: community associated pneumonie), tiefe Atemwegsinfektion (LRTI: Lower respiratory tract infections).
  • Im Rahmen dieser Erfindung wird unter Pneumonie eine akute oder chronische Erkrankung des Lungengewebes verstanden und dessen Infektion ist verursacht durch Bakterien, Viren oder Pilze, Parasiten, selten auch toxisch durch Inhalation giftiger Stoffe oder immunologisch. Für den Kliniker ist die Pneumonie eine Konstellation verschiedener Symptome (Fieber oder Hypothermie, Schüttelfrost, Husten, pleuritischer Thoraxschmerz, gesteigerte Sputumproduktion, erhöhte Atemfrequenz, Klopfschalldämpfung, Bronchialatmen, ohrnahe Rasselgeräusche, Pleurareiben) in Kombination mit mindestens einem auf dem Thorax-Röntgenbild erkennbaren Infiltrat (Harrisons Innere Medizin, herausgegeben von Manfred Dietel, Norbert Suttorp und Martin Zeitz, ABW Wissenschaftsverlag 2005).
  • Im Rahmen dieser Erfindung wird unter "Erkrankungen der Atemwege und der Lunge" insbesondere "chronische Erkrankungen der Lunge und Atemwege" verstanden und zwar solche Indikationen, wie Interstitielle Lungenerkrankungen und Lungenfibrosen, Chronisch obstruktive Lungenerkrankungen (COPD), insbesondere COPD Infekt-Exazerbationen, Asthma bronchiale, insbesondere Infekt-Exazerbationen bei Asthma bronchiale, Bronchialkarzinom. Ganz besonders bevorzugt ist COPD, insbesondere COPD Infekt-Exazerbationen.
  • COPD bezeichnet erfindungsgemäß eine Gruppe von chronischen Krankheiten, die durch Husten, vermehrten Auswurf und Atemnot bei Belastung gekennzeichnet sind. In erster Linie sind die chronisch-obstruktive Bronchitis und das Lungenemphysem zu nennen. Beide Krankheitsbilder sind dadurch gekennzeichnet, dass vor allem die Ausatmung (Exspiration) behindert ist. Eine umgangssprachliche Bezeichnung für das Hauptsymptom der COPD ist zudem "Raucherhusten". Die Erfindung ist besonders vorteilhaft bei akuten Exazerbationen.
  • Alle genannten Indikationen werden zudem z.B. im Pschyrembel, De Gruyter, 9. Auflage, Berlin 2004 beschrieben.
  • Der Begriff "Risikostratifizierung" umfasst erfindungsgemäß das Auffinden von Patienten, insbesondere Notfallpatienten und Risikopatienten, mit der schlechteren Prognose, zwecks intensiverer Diagnostik und Therapie/Behandlung von Erkrankungen der Atemwege und Lunge, insbesondere von Infektionen und chronischen Entzündungen mit dem Ziel einen möglichst günstigen Verlauf der Krankheit zu ermöglichen. Eine erfindungsgemäße Risikostratifizierung erlaubt in Folge ein effektives Behandlungsverfahren zur Behandlung oder Therapie von Infektionen oder chronischen Erkrankungen der Atemwege und Lunge mittels Antibiotika.
  • Daher betrifft die Erfindung ebenfalls die Identifizierung von Patienten mit erhöhtem Risiko oder/und einer ungünstigen Prognose von Erkrankungen der Atemwege und Lunge und zwar bei symptomatischen und / oder asymptomatischen Patienten, insbesondere Notfallpatienten.
  • Besonders vorteilhaft kann insbesondere in Fällen der Notfall- und /oder Intensivmedizin mittels des erfindungsgemäßen Verfahren eine sichere Stratifizierung erfolgen. Das erfindungsgemäße Verfahren ermöglicht daher klinische Entscheidungen, die zu einem schnellen Therapieerfolg und zur Vermeidung von Todesfällen führen. Solche klinischen Entscheidungen umfassen ebenfalls weiterführende Behandlung mittels Arzneimitteln zur Behandlung oder Therapie von Erkrankungen der Atemwege und Lunge.
  • Daher betrifft die Erfindung ebenfalls ein Verfahren zur Diagnose und / oder Risikostratifizierung von Patienten von Erkrankungen der Atemwege und Lunge zur Durchführung von klinischen Entscheidungen, wie weiterführende Behandlung und Therapie mittels Arzneimitteln, vorzugsweise in der zeitlich kritischen Intensivmedizin oder Notfallmedizin, einschließlich der Entscheidung zur Hospitalisierung des Patienten.
  • In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform betrifft das erfindungsgemäße Verfahren daher die Therapiesteuerung von Erkrankungen der Atemwege.
  • In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens erfolgt die zur Diagnose und / oder Risikostratifizierung zur Prognose, zur differentialdiagnostischen Früherkennung und Erkennung, zur Beurteilung des Schweregrades und zur therapiebegleitenden Verlaufsbeurteilung.
  • In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform betrifft die Erfindung ein Verfahren zur in-vitro Diagnostik zur Früh- oder Differentialdiagnose oder Prognose von Erkrankungen der Atemwege und Lunge, wobei eine Bestimmung des Marker NT-proET-1 oder Fragmente und Teilpeptide davon, an einem zu untersuchenden Patienten durchgeführt wird.
  • In einer Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens wird dem zu untersuchenden Patienten Körperflüssigkeit, vorzugsweise Blut entnommen, wahlweise Vollblut oder Serum oder erhältliches Plasma und die Diagnose erfolgt in vitro/ex vivo, d.h. außerhalb des menschlichen oder tierischen Körpers. Aufgrund der Bestimmung des Markers NT-proET-1 oder Fragmenten und Teilpeptiden davon, wird eine hohe Sensitivität und Spezifität erzielt (siehe Beispiele und Figuren) und anhand der vorhandenen Menge in mindestens einer Patientenprobe kann die Diagnose oder Risikostratifizierung erfolgen.
  • Im Rahmen dieser Erfindung wird unter "NT-proET-1" ein humanes Protein oder Polypeptid verstanden, das aus dem Preproendothelin erhalten werden kann und im Rahmen des Preproendothelins (SEQ ID No.1 und Figur 1) die freien Fragmente mit den Aminosäuren 18-52 umfassen und die Fragmente APETAVLGAELSAV (SEQ ID No. 2) Pos. 18-31 von preproET-1 (SEQ ID No.1 und Figur 1) und GENGGEKPTPSPPWRLRRSKR (SEQ ID No. 3) Pos. 32-52 von preproET-1 (SEQ ID No.1 und Figur 1). Ferner können diese erfindungsgemäßen Polypeptide posttranslationale Modifikationen aufweisen, wie Glykolisierung, Lip(o)idisierung oder Derivatisierungen.
  • In einer weiteren Ausführungsform kann die Bestimmung von NT-proET-1 oder Fragmenten und Teilpeptiden davon, zusätzlich mit weiteren Markern erfolgen und zwar vorzugsweise solche, die bereits auf Erkrankungen der Atemwege und Lunge hinweisen.
  • Daher betrifft die Erfindung eine solche Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens, wobei die Bestimmung zusätzlich mit mindestens einem weiteren Marker ausgewählt aus der Gruppe inflammatorischer Marker, cardiovaskulärer Marker, neurohormonaler Marker oder ischämischer Marker an einem zu untersuchenden Patienten durchgeführt wird.
  • Erfindungsgemäß kann der inflammatorische Marker aus mindestens einem Marker aus der Gruppe C-reaktivem Protein (CRP), Cytokinen, wie etwa TNF-alpha, Interleukinen, wie etwa IL-6, Procalcitonin (1-116, 3-116) und Adhäsionsmolekülen, wie VCAM oder ICAM ausgewählt sein sowie der cardiovaskuläre Marker, insbesondere ein Nekrose von Herzmuskelgewebe anzeigender Marker und den Blutdruck beeinflussender Marker aus mindestens einem Marker aus der Gruppe Kreatinkinase, Myoglobin, Myeloperoxidase, natriuretisches Protein, insbesondere ANP (bzw. ANF), proANP, NT-proANP, BNP, proBNP, NT-proBNP oder jeweils eine Teilsequenz davon, kardiale Troponin, CRP ausgewählt sein. Ferner werden hierunter ebenfalls Kreislaufregulierende (Pro)Hormone verstanden, insbesondere wie pro-Gastrin-Releasing Peptid (proGRP), pro-Endothelin-2, pro-Endothelin-3, pro-Leptin, pro-Neuropeptid-Y, pro-Somatostatin, pro-Neuropeptid-YY, pro-Opiomelanocortin, pro-Adrenomedullin (proADM), pro-Vasopressin (proAVP) oder jeweils eine Teilsequenz davon.
    Der ischämische Marker kann aus mindestens einem Marker aus der Gruppe Troponin I und T, CK-MB ausgewählt sein. Darüber hinaus kann der neurohormonale Marker mindestens ein weiteres natriuretisches Protein sein, insbesondere ANP (bzw. ANF), proANP, NT-proANP, BNP, proBNP oder jeweils eine Teilsequenz davon.
  • In einer weiteren Ausführungsform der Erfindung kann das erfindungsgemäße Verfahren im Rahmen einer in-vitro Diagnose mittels parallelen oder simultanen Bestimmungen der Marker durchgeführt werden (z.B. Multititerplatten mit 96 und mehr Kavitäten), wobei die Bestimmungen an mindestens einer Patientenprobe durchgeführt werden.
  • Ferner kann das erfindungsgemäße Verfahren und dessen Bestimmungen in einer diagnostischen Vorrichtung anhand eines Analyseautomaten, insbesondere mittels einem Kryptor (http://www.kryptor.net/) durchgeführt werden.
  • In einer weiteren Ausführungsform kann das erfindungsgemäße Verfahren und dessen Bestimmungen mittels einem Schnelltest durchgeführt werden (z.B. lateral-flow Test oder Point-of Care), sei es in Einzel- oder Multiparameterbestimmung. In einer besonders bevorzugten Ausführungsform handelt es sich um einen Selbsttest oder um eine Vorrichtung, die in der Notfalldiagnostik geeignet ist.
  • Ferner betrifft die Erfindung die Verwendung von NT-proET-1 oder Fragmente davon, zur Risikostratifizierung von Erkrankungen der Atemwege und Lunge und/oder zur in-vitro Diagnostik zur Früh- oder Differentialdiagnose oder Prognose von Erkrankungen der Atemwege und Lunge.
  • Eine weitere Aufgabe ist die Verwendung einer entsprechenden diagnostischen Vorrichtung zur Durchführung des erfindungsgemäßen Verfahrens.
  • Im Rahmen dieser Erfindung wird unter einer solchen diagnostischen Vorrichtung, insbesondere ein Array oder Assay verstanden (z.B. Immunoassay, ELISA etc.), im weitesten Sinne eine Vorrichtung zur Durchführung des erfindungsgemäßen Verfahrens.
  • Die Erfindung betrifft zudem die Verwendung eines Kits zur Diagnose und / oder Risikostratifizierung von Erkrankungen der Atemwege und Lunge, enthaltend Nachweisreagenzien zur Bestimmung von NT-proET-1 oder Fragmenten davon, ggfs. oben genannte weitere Marker. Solche Nachweisreagenzien umfassen z.B. Antikörper etc.
  • Nachfolgende Beispiele und Figuren dienen zur näheren Erläuterung der Erfindung, jedoch ohne die Erfindung auf diese Beispiele und Figuren zu beschränken.
    • Beispiele und Figuren: Immunoassay
  • Es wurde ein Sandwichimmunoassay zur Messung von NT-proET-1 wie beschrieben in Struck et al (Struck J, Morgenthaler NG, Bergmann A. Proteolytic processing pattern of the endothelin-1 precursor in vivo. Peptides 2005; 26:2482-6) verwendet.
    • Peptidsynthesen:
  • Abgeleitet von der bekannten Aminosäuresequenz von preproET-1 (Figur 1) wurden zwei Bereiche ausgewählt (Pos. 18-31, 32-52). Die Bereiche wurden, in einem Fall ergänzt um einen N-terminalen Cystein-Rest, nach Standardverfahren als lösliche Peptide chemisch synthetisiert, gereinigt, mittels Massenspektrometrie und Reversed Phase HPLC qualitätskontrolliert und in Aliquots lyophilisiert (Firma JPT, Berlin, Deutschland). Die Aminosäuresequenzen der Peptide lauten:
    • PAV15 CAPETAVLGAELSAV Pos. 18-31 von preproET-1 (Figur 1),
    • MPGC22 GENGGEKPTPSPPWRLRRSKRC Pos. 32-52 von preproET-1 (Figur 1).
    Des Weiteren wurde ein Peptid synthetisiert, das den Bereich Pos. 18-52 von preproET-1 umfasst (PAR35 APETAVLGAELSAVGENGGEKPTPSPPWRLRRSKR). Konjugation und Immunisierung
  • Mittels MBS (m-Maleimidobenzoyl-N-hydroxysuccinimid Ester) wurden die Peptide PAV15 und MPGC22 an das Trägerprotein KLH (Keyhole limpet hemocyanin) konjugiert (s. Arbeitsanleitung "NHS-Esters-Maleimide Crosslinkers" Firma PIERCE, Rockford, IL, USA). Mit diesen Konjugaten wurden Schafe nach folgendem Schema immunisiert: Jedes Schaf erhielt initial 100 µg Konjugat (Massenangabe bezogen auf den Peptid-Anteil des Konjugats) und anschließend 4-wöchentlich je 50 µg Konjugat (Massenangabe bezogen auf den Peptid-Anteil des Konjugats). Beginnend mit dem vierten Monat nach Beginn der Immunisierung wurden 4-wöchentlich je Schaf 700 ml Blut abgenommen und daraus durch Zentrifugation Antiserum gewonnen. Konjugationen, Immunisierungen und Gewinnung von Antiseren wurden von der Firma MicroPharm, Carmarthenshire, UK, durchgeführt.
    • Reinigung der Antikörper
  • In einem 1-Schritt Verfahren wurden aus den Antiseren, die beginnend mit dem vierten Monat nach der Immuniserung gewonnen worden waren, die Peptid-spezifischen Antikörper präpariert. Dazu wurden zunächst die Peptide PAV15 und MPGC22 an SulfoLink Gel gekoppelt (s. Arbeitsanleitung "SulfoLink Kit" Firma PIERCE, Rockford, IL, USA). Dabei wurden zur Kopplung je 5 mg Peptid pro 5 ml Gel angeboten.
  • Die Affinitätsreinigung von Peptid-spezifischen Antikörpern aus Schaf Antiseren gegen die Peptide wurde wie folgt durchgeführt:
    • Die Peptid-Säulen wurden zunächst dreimal im Wechsel mit je 10 ml Elutionspuffer (50 mM Citronensäure, pH 2.2) und Bindungspuffer (100 mM Natriumphosphat, 0.1% Tween, pH 6.8) gewaschen. 100 ml der Antiseren wurden über 0,2 µm filtriert und mit dem vorhandenen Säulenmaterial versetzt. Dazu wurde das Gel quantitativ mit 10 ml Bindungspuffer aus der Säule gespült. Die Inkubation erfolgte über Nacht bei Raumtemperatur unter Schwenken. Die Ansätze wurden quantitativ in Leersäulen (NAP 25, Pharmacia, entleert) überführt. Die Durchläufe wurden verworfen. Anschließend wurde mit 250 ml Bindungspuffer proteinfrei (Proteingehalt des Wascheluats < 0,02 A280 nm) gewaschen. Auf die gewaschene Säulen wurde Elutionspuffer gegeben, und es wurden Fraktionen ä 1 ml gesammelt. Von jeder Fraktion wurde der Proteingehalt mittels der BCA-Methode (s. Arbeitsanleitung Firma PIERCE, Rockford, IL, USA) bestimmt. Fraktionen mit Proteinkonzentrationen > 0.8 mg/ml wurden gepoolt. Nach Proteinbestimmung der Pools mittels der BCA-Methode ergaben sich Ausbeuten von 27 mg für den anti-PAV15 Antikörper und 35 mg für den anti- MPGC22 Antikörper.
    Markierung
  • Über NAP-5 Gelfiltrationssäulen (Pharmacia) wurden 500 µl des gereinigten anti-MPGC22 Antikörpers s.o.) in 1 ml 100 mM Kalium-Phosphatpuffer (pH 8,0) nach Arbeitsanleitung umgepuffert. Die Proteinkonzentationen der Antikörperlösung wurden mit 100 mM Kalium-Phosphatpuffer (pH 8,0) auf 1,5 mg/ml eingestellt.
  • Zur Chemilumineszenzmarkierung wurde der Antikörper wie folgt weiterbehandelt: 67 µl der Antikörperlösung wurden mit 10 µl MA70-Akridinium-NHS-Ester (1 mg/ml; Firma HOECHST Behring) versetzt und 15 Minuten bei Raumtemperatur inkubiert. Dann wurden 423 µl 1 M Glycin zugesetzt und weitere 10 Minuten inkubiert. Anschließend wurde der Markierungsanastz über eine NAP-5 Gelfiltrationssäule (Pharmacia) in 1 ml Laufmittel A (50 mM Kaliumphosphat, 100 mM NaCl, pH 7.4) nach Arbeitsanleitung umgepuffert und dabei von niedermolekularen Bestandteilen befreit. Zur Abtrennung letzter Reste nicht an Antikörper gebundenen Labels wurde eine Gelfiltrations-HPLC durchgeführt (Säule: Waters Protein Pak SW300). Die Probe wurde aufgetragen und bei einer Flußrate von 1 ml/min mit Laufmittel A chromatographiert. Mit einem Duchflußphotometer wurden die Wellenlängen 280 nm und 368 nm gemessen. Das Absorbtionsverhältnis 368 nm/280 nm als Maß für den Markierungsgrad des Antikörpers betrug am Peak 0.10 +/- 0.01. Die monomeren Antikörper enthaltenden Fraktionen (Retentionszeit 8-10 min) wurden gesammelt und in 3 ml 100 mM Natriumphosphat, 150 mM NaCl, 5% Bovines Serum Albumin, 0.1% Natrium Azid, pH 7.4, gesammelt.
    • Kopplung
  • Bestrahlte 5 ml Polystyrolröhrchen (Firma Greiner) wurden mit gereinigtem anti-PAV15 Antikörper wie folgt beschichtet: Der Antikörper wurde in 50 mM Tris, 100 mM NaCl, pH 7.8 zu einer Konzentration von 6.6 µg/ml verdünnt. In jedes Röhrchen wurden 300 µl dieser Lösung pipettiert. Die Röhrchen wurden 20 Stunden bei 22°C inkubiert. Die Lösung wurde abgesaugt. Dann wurde jedes Röhrchen mit 4.2 ml 10 mM Natriumphosphat, 2% Karion FP, 0.3% Bovines Serum Albumin, pH 6.5 befüllt. Nach 20 Stunden wurde die Lösung abgesaugt. Schließlich wurden die Röhrchen in einem Vakuumtrockner getrocknet.
    • Durchführung und Auswertung des Immunoassays
  • Als Standardmaterial diente Peptid PAR35, das seriell in Pferdenormalserum (Firma SIGMA) verdünnt wurde. Den so hergestellten Standards wurden Konzentrationen gemäß der Peptideinwaage zugeschrieben.
    Der Sandwichimmunoassay wurde wie folgt angesetzt: In die jeweiligen mit Antikörpern beschichteten Teströhrchen wurden 50 µl Standards bzw. Proben sowie 200 µl Assaypuffer (100 mM Natriumphosphat, 150 mM NaCl, 5% Bovines Serum Albumin, 0.1% unspez. Schaf IgG, 0.1% Natrium Azid, pH 7.4), enthaltend 1 Million RLU (relative light units) des MA70-markierten Antikörpers, pipettiert. Es wurde 2 Stunden bei 22°C unter Schütteln inkubiert. Dann wurde 4 x mit je 1 ml Waschlösung (0.1% Tween 20) pro Röhrchen gewaschen, abtropfen gelassen und die am Röhrchen gebundene Chemilumineszenz in einem Luminometer (Firma BERTHOLD, LB952T; Basisreagenzien BRAHMS AG) vermessen. Unter Verwendung der Software MultiCalc (Spline Fit) wurden die NT-proET-1 Konzentrationen der Proben an der Standardkurve abgelesen.
    Analyt, der mit dem beschriebenen Assay gemessen werden kann, wird bezeichnet als N-terminales proEndothelin-1 (NT-proET-1).
    • Klinische Wertigkeit (Beispiele, die Patienten mit Herzerkrankungen betreffen, dienen als Referenz). Normalbereich
  • NT-proET-1 Konzentrationen wurden in Proben von gesunden Kontrollpersonen (n=200) bestimmt. Der Median lag bei 30,5 pmol/L, der kleinste gemessene Wert bei 2,0 der größte bei 53 pmol/L, die 95% Percentilen bei 16,3 bzw. 47,2 pmol/L.
    • Herzinsuffizienz / Schweregrad
  • Es wurden NT-proET-1 Konzentrationen bei Patienten mit chronischer oder akut dekompensierter Herzinsuffizienz vermessen. NT-proET-1 Konzentrationen waren mit dem Schweregrad der Herzinsuffizienz assoziiert, insbesondere mit erhöhtem Schweregrad: Die Mediane der NT-proET-1 Konzentrationen bei den vier Schweregrad-Kategorien NYHA I-IV waren: 35,4, 37,3, 45,5 bzw. 83,9 pmol/L (s. Fig. 2).
    • Chronische Herzinsuffizienz / Diagnose
  • Von einem Kollektiv von 316 Patienten mit chronischer Herzinsuffizienz sowie 200 gesunden Kontrollen wurden NT-proET-1 Werte bestimmt. Die Receiver-Operator-Characteristics Analyse ergab eine AUC von 0,72. Bei einem Cut-off-Wert von 49,7 pmol/L ergab sich eine Sensitivität von 34,3% bei einer Spezifität von 98%. Bei einem Cut-off-Wert von 47,2 pmol/L ergab sich eine Sensitivität von 38,5% bei einer Spezifität von 95%.
    • Chronische Herzinsuffizienz / Prognose
  • Von einem Kollektiv von 316 Patienten mit chronischer Herzinsuffizienz wurden NT-proET-1 Werte bestimmt. Die Patienten wurden über einen mittleren Zeitraum von 360 Tagen beobachtet. In diesem Zeitraum starben 42 Patienten, 274 überlebten. Durch Receiver-Operator-Characteristics Analyse wurde der beste Cut-off-Wert (definiert als das größte Produkt aus Sensitivität und Spezifität) zur Prognose der Mortalität ermittelt: 51,3 pmol/L. Bei diesem Cut-off-Wert betrug die Sensitivität der Prognose 71,4%, die Spezifität betrug 74,5%. Die Likelihood Ratio zu versterben betrug bei einem Cut-off-Wert von 51,3 pmol/L: 2,8.
    <51,3 pmol/L >51,3 pmol/L
    Überlebende 204 70
    Tote 12 30
    • Akute Herzinsuffizienz / Diagnose
  • Von einem Kollektiv von 125 Patienten mit akuter Atemnot wurden NT-proET-1 Werte bestimmt. Von den 125 Patienten hatten 69 Patienten Herzinsuffizienz. Die Receiver-Operator-Characteristics Analyse für die Differentialdiagnose der Herzinsuffizienz ergab eine AUC von 0,72. Bei einem Cut-off-Wert von 111 pmol/L ergab sich eine Sensitivität von 10,2% bei einer Spezifität von 98%. Bei einem Cut-off-Wert von 90,5 pmol/L ergab sich eine Sensitivität von 17,5% bei einer Spezifität von 95%.
    • Akute Herzinsuffizienz / Prognose
  • Von einem Kollektiv von 69 Patienten mit akut dekompensierter Herzinsuffizienz wurden NT-proET-1 Werte bestimmt. Die Patienten wurden über einen Zeitraum von 360 Tagen beobachtet. In diesem Zeitraum starben 21 Patienten, 48 überlebten. Durch Receiver-Operator-Characteristics Analyse wurde der beste Cut-off-Wert (definiert als das größte Produkt aus Sensitivität und Spezifität) zur Prognose der Mortalität ermittelt: 64 pmol/L. Bei diesem Cut-off-Wert betrug die Sensitivität der Prognose 66,6%, die Spezifität betrug 68,7%. Die Likelihood Ratio zu versterben betrug bei einem Cut-off-Wert von 64 pmol/L: 2,0.
    <64 pmol/L >64 pmol/L
    Überlebende 33 15
    Tote 7 14
    • Myokardinfarkt / Prognose
  • Von 246 Patienten mit akutem Herzinfarkt wurden drei Tage nach Eintreten des Herzinfarkts Proben gewonnen und es wurde NT-proET-1 gemessen. Die Patienten wurden über einen Zeitraum von 60 Tagen beobachtet. In diesem Zeitraum hatten 220 Patienten kein adverses Ereignis, 26 starben oder wurden wegen Herzinsuffizienz rehospitalisiert. Durch Receiver-Operator-Characteristics Analyse (AUC = 0,70) wurde der beste Cut-off-Wert (definiert als das größte Produkt aus Sensitivität und Spezifität) zur Prognose der Mortalität bzw. Rehospitalisierung wegen Herzinsuffizienz ermittelt: 63,9 pmol/L. Bei diesem Cut-off-Wert betrug die Sensitivität der Prognose 65,4%, die Spezifität betrug 73,6%. Die Likelihood Ratio eines adversen Ereignisses betrug bei einem Cut-off-Wert von 63,9 pmol/L: 2.5.
    <63,9 pmol/L >63,9 pmol/L
    keine adverses Ereignis 162 58
    Tot/Herzinsuffizienz 9 17
    • Pneumonie / Schweregrad und Prognose
  • Von 142 Patienten mit ambulant erworbener Pneumonie wurden bei Aufnahme ins Krankenhaus Proben gewonnen und es wurde NT-proET-1 gemessen. Die Patienten wurden über einen Zeitraum von 70 Tagen beobachtet. In diesem Zeitraum starben 10 Patienten. NT-proET-1 Konzentrationen stiegen mit dem PSI (Pneumonia Severity Index), einem Score für den Schweregrad der Erkrankung (Figur 3) und waren im Median mit 53 pmol/L gegenüber gesunden Kontrollen (30,5 pmol/L) erhöht. Für die Prognose der Mortalität erbrachte die Receiver-Operator-Characteristics Analyse eine AUC von 0,89. Durch Receiver-Operator-Characteristics Analyse wurde der beste Cut-off-Wert (definiert als das größte Produkt aus Sensitivität und Spezifität) zur Prognose der Mortalität ermittelt: 77 pmol/L. Bei diesem Cut-off-Wert betrug die Sensitivität der Prognose 100%, die Spezifität betrug 81,2%. Die Likelihood Ratio der Mortalität betrug bei einem Cut-off-Wert von 77 pmol/L: 5.5.
    <77 pmol/L >77 pmol/L
    keine adverses Ereignis 108 24
    Tot 0 10
    • Exacerbierte COPD
  • Von 53 Patienten mit chronisch obstruktiver Lungenerkrankung und gleichzeitiger Infektion der unteren Atemwege wurde NT-proET-1 gemessen. Mit im Median 47 pmol/L waren diese Patienten gegenüber gesunden Kontrollen (30,5 pmol/L) erhöht, lagen jedoch niedriger als Pneumonie Patienten (s.o. 53 pmol/L).
  • Tabelle: Klassifikation der New York Heart Association (NYHA)
    • NYHA I
    Keine körperliche Einschränkung. Alltägliche körperliche Belastung verursacht keine inadäquate Erschöpfung, Rhythmusstörungen, Luftnot oder Angina Pectoris.
    NYHA II
    Leichte Einschränkung der körperlichen Belastbarkeit. Keine Beschwerden in Ruhe. Erschöpfung, Rhythmusstörungen, Luftnot oder Angina pectoris bei alltäglicher körperlicher Belastung.
    NYHA
    IIIHöhergradige Einschränkung der körperlichen Leistungsfähigkeit bei gewohnter Tätigkeit. Keine Beschwerden in Ruhe. Erschöpfung, Rhythmusstörungen, Luftnot oder Angina pectoris bei geringer körperlicher Belastung.
    NYHA IV
    Beschwerden bei allen körperlichen Aktivitäten und in Ruhe. Bettlägrigkeit.
    Beschreibung der Figuren:
    • Figur 1 zeigt die Aminosäuresequenz (AS) von preproEndothelin-1 mit den Abschnitten 1-17 Signalpeptid, 18-52 NT-proET-1, 53-73 reifes ET-1, 53-90 Big ET-1 (bzw. 74-90).
    • Figur 2:
      • NT-proET-1 Konzentrationen in Abhängigkeit vom Schweregrad der Herzinsuffizienz. Dargestellt sind die Mittelwerte (+SEM) von gesunden Kontrollen (n=200), sowie von Herzinsuffizienzpatienten gruppiert nach NYHA Schweregrad (NYHA I: n=22, NYHA II: n=126, NYHA III: n=132, NYHA 4: n=17).
    • Figur 3:
      • NT-proET-1 Konzentrationen in Abhängigkeit vom Schweregrad der Pneumonie. Dargestellt sind die Mittelwerte (+SEM) von gesunden Kontrollen (n=200), sowie von Pneumoniepatienten gruppiert nach Pneumonia Severity Index (PSI I: n=36, PSI II: n=44, PSI III: n=25, PSI IV: n=19, PSI V: n=18).
    SEQUENCE LISTING
    • <110> BRAHMS GmbH
    • <120> Diagnose und Risikostratifizierung mittels NT-proET-1
    • <130> 03/07 BRA35WOEP-02
    • <140> PCT/DE2008/000781
      <141> 2008-05-08
    • <150> 10 2007 041 443.1
      <151> 2007-05-08
    • <160> 6
    • <170> PatentIn version 3.3
    • <210> 1
      <211> 212
      <212> PRT
      <213> Human
    • <400> 1
      Figure imgb0001
      Figure imgb0002
    • <210> 2
      <211> 14
      <212> PRT
      <213> Human
    • <400> 2
      Figure imgb0003
    • <210> 3
      <211> 21
      <212> PRT
      <213> Human
    • <400> 3
      Figure imgb0004
    • <210> 4
      <211> 15
      <212> PRT
      <213> Artificial
    • <220>
      <223> synthetic derivat
    • <400> 4
      Figure imgb0005
    • <210> 5
      <211> 22
      <212> PRT
      <213> artificial
    • <220>
      <223> synthetic derivat
    • <400> 5
      Figure imgb0006
      Figure imgb0007
    • <210> 6
      <211> 35
      <212> PRT
      <213> Human
    • <400> 6
      Figure imgb0008

Claims (17)

  1. Verfahren zur in-vitro Diagnose und / oder Risikostratifizierung von Erkrankungen der Lunge und Atemwege, dadurch gekennzeichnet, dass eine Bestimmung des freien Fragments 18-52 aus SEQ ID No 1 (NT-proET-1) oder ein Fragment ausgewählt aus SEQ ID No. 2, SEQ ID No. 3 in einer Körperflüssigkeitsprobe von einem zu untersuchenden Patienten erfolgt.
  2. Verfahren zur Diagnose und / oder Risikostratifizierung von Erkrankungen der Lunge und Atemwege nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass diese ausgewählt sind aus Infektionen verursacht durch Bakterien, Viren, Pilze oder Parasiten, insbesondere tiefe Atemwegsinfektion (LRTI: Lower respiratory tract infections), Bronchitis, Pneumonie, Sarkoidose, Bronchiektasen, Nicht-kardiales Lungenödem und / oder chronische Erkrankungen der Lunge und Atemwege, insbesondere Interstitielle Lungenerkrankungen und Lungenfibrosen, Chronisch obstruktive Lungenerkrankungen (COPD), insbesondere COPD Infekt-Exazerbationen, Asthma bronchiale, insbesondere Infekt-Exazerbationen bei Asthma bronchiale.
  3. Verfahren zur Diagnose und / oder Risikostratifizierung nach einem der vorherigen Ansprüche, zur Identifizierung von Patienten mit erhöhtem Risiko oder/und einer ungünstigen Prognose von Erkrankungen der Lunge und Atemwege.
  4. Verfahren zur Diagnose und / oder Risikostratifizierung nach einem der vorherigen Ansprüche, wobei der Patient ein symptomatischer und / oder asymptomatischer Patient, insbesondere ein Notfallpatient ist.
  5. Verfahren zur Diagnose und / oder Risikostratifizierung nach einem der vorherigen Ansprüche, zur Therapiesteuerung von Erkrankungen der Lunge und Atemwege, insbesondere in der Intensivmedizin oder Notfallmedizin.
  6. Verfahren zur Diagnose und / oder Risikostratifizierung von Erkrankungen der Lunge und Atemwege nach einem der vorherigen Ansprüche zur Durchführung von klinischen Entscheidungen, insbesondere weiterführende Behandlungen und Therapien mittels Arzneimitteln, insbesondere in der Intensivmedizin oder Notfallmedizin, einschließlich der Entscheidung zur Hospitalisierung des Patienten.
  7. Verfahren zur Diagnose und / oder Risikostratifizierung von Erkrankungen der Lunge und Atemwege nach einem der vorherigen Ansprüche zur Prognose, zur differentialdiagnostischen Früherkennung und Erkennung, zur Beurteilung des Schweregrades und zur therapiebegleitenden Verlaufsbeurteilung.
  8. Verfahren nach einem der vorherigen Ansprüche,
    dadurch gekennzeichnet,
    dass zusätzlich eine Bestimmung mindestens eines weiteren Markers ausgewählt aus der Gruppe inflammatorischer Marker, cardiovaskulärer Marker, neurohormonaler Marker oder ischämischer Marker durchgeführt wird.
  9. Verfahren nach einem der vorherigen Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass der inflammatorische Marker aus mindestens einem Marker aus der Gruppe C-reaktivem Protein (CRP), Cytokinen, wie etwa TNF-alpha, Interleukinen, wie etwa IL-6, Procalcitonin (1-116, 3-116) und Adhäsionsmolekülen, wie VCAM oder ICAM ausgewählt ist.
  10. Verfahren nach einem der vorherigen Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass der cardiovaskuläre Marker aus mindestens einem Marker aus der Gruppe Kreatinkinase, Myoglobin, Myeloperoxidase, natriuretisches Protein, insbesondere ANP (bzw. ANF), proANP, NT-proANP, BNP, proBNP, NT-proBNP oder jeweils eine Teilsequenz davon, kardiale Troponin, CRP sowie Kreislaufregulierende (Pro)Hormone, wie pro-Gastrin-Releasing Peptid (proGRP), pro-Endothelin-2, pro-Endothelin-3, pro-Leptin, pro-Neuropeptid-Y, pro-Somatostatin, pro- Neuropeptid-YY, pro-Opiomelanocortin, pro-Adrenomedullin (proADM), pro-Vasopressin (proAVP) oder jeweils eine Teilsequenz davon ausgewählt ist.
  11. Verfahren nach einem der vorherigen Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass der ischämische Marker aus mindestens einem Marker aus der Gruppe Troponin I und T, CK-MB ausgewählt ist.
  12. Verfahren nach einem der vorherigen Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass der neurohormonale Marker mindestens ein natriuretisches Protein ist, insbesondere ANP (bzw. ANF), proANP, NT-proANP, BNP, proBNP, NT-proBNP oder eine Teilsequenz davon ist.
  13. Verfahren nach einem der vorherigen Ansprüche,
    dadurch gekennzeichnet,
    dass parallele oder simultane Bestimmungen der Marker durchgeführt werden.
  14. Verfahren nach einem der vorherigen Ansprüche,
    dadurch gekennzeichnet,
    dass die Bestimmungen an mindestens einer Patientenprobe durchgeführt werden.
  15. Verfahren nach einem der vorherigen Ansprüche,
    dadurch gekennzeichnet, dass die Bestimmungen mittels einem Schnelltest, insbesondere in Einzel- oder Multiparameterbestimmungen durchgeführt werden.
  16. Verwendung des freien Fragments 18-52 aus SEQ ID No 1 (NT-proET-1) oder ein Fragment ausgewählt aus SEQ ID No. 2, SEQ ID No. 3, zur Diagnose und / oder Risikostratifizierung von Erkrankungen der Lunge und Atemwege und ggfs. weitere Marker nach einem der Ansprüche 8 bis 12.
  17. Verwendung eines Kits zur Diagnose und / oder Risikostratifizierung von Erkrankungen der Lunge und Atemwege enthaltend Nachweisreagenzien zur Bestimmung des freien Fragments 18-52 aus SEQ ID No 1 (NT-proET-1) oder ein Fragment ausgewählt aus SEQ ID No. 2, SEQ ID No. 3, und ggfs. weitere Marker nach einem der Ansprüche 8 bis 12 und Hilfsmittel.
EP10191423A 2007-05-08 2008-05-08 Diagnose und Risikostratifizierung mittels NT-proET-1 Active EP2306203B1 (de)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE102007021443A DE102007021443A1 (de) 2007-05-08 2007-05-08 Diagnose und Risikostratifizierung mittels NT-proET-1
EP08758039.5A EP2147316B1 (de) 2007-05-08 2008-05-08 Diagnose und risikostratifizierung mittels nt-proet-1

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EP08758039.5 Division 2008-05-08

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EP2306203A1 EP2306203A1 (de) 2011-04-06
EP2306203B1 true EP2306203B1 (de) 2012-07-11

Family

ID=39745333

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EP08758039.5A Active EP2147316B1 (de) 2007-05-08 2008-05-08 Diagnose und risikostratifizierung mittels nt-proet-1
EP10191423A Active EP2306203B1 (de) 2007-05-08 2008-05-08 Diagnose und Risikostratifizierung mittels NT-proET-1

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EP08758039.5A Active EP2147316B1 (de) 2007-05-08 2008-05-08 Diagnose und risikostratifizierung mittels nt-proet-1

Country Status (8)

Country Link
US (2) US9261516B2 (de)
EP (2) EP2147316B1 (de)
JP (2) JP5717442B2 (de)
CN (2) CN104374926B (de)
DE (1) DE102007021443A1 (de)
ES (2) ES2388055T3 (de)
HK (2) HK1203089A1 (de)
WO (1) WO2008135038A2 (de)

Families Citing this family (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8906857B2 (en) * 2005-12-01 2014-12-09 B.R.A.H.M.S. Gmbh Methods for the diagnosis and treatment of critically ill patients with endothelin, endothelin agonists and adrenomedullin antagonists
US7838250B1 (en) 2006-04-04 2010-11-23 Singulex, Inc. Highly sensitive system and methods for analysis of troponin
CA3086149A1 (en) 2006-04-04 2007-10-11 Singulex, Inc. Highly sensitive system and methods for analysis of troponin
DE102006046996A1 (de) * 2006-10-01 2008-04-03 Brahms Aktiengesellschaft Diagnose von Infektionen oder Entzündungserkrankungen der Atemwege und Lunge assoziiert mit Herzinsuffizienz
DK2084543T3 (en) 2006-10-26 2018-01-22 Brahms Gmbh Risk stratification of acute coronary syndrome using fragments / sub-peptides of provasopressin, especially copeptin or neurophysin II
DE102006053442A1 (de) * 2006-11-12 2008-05-15 Brahms Aktiengesellschaft Diagnose und Risikostratifizierung von Infektionen und chronischen Erkrankungen der Atemwege und Lunge mittels proVasopressin, insbesondere Copeptin oder Neurophysin II
DE102006060112A1 (de) 2006-12-20 2008-06-26 Brahms Aktiengesellschaft Diagnose und Risikostratifizierung mittels dem neuen Marker CT-proADM
DE102007021443A1 (de) * 2007-05-08 2008-11-13 Brahms Aktiengesellschaft Diagnose und Risikostratifizierung mittels NT-proET-1
US9229013B2 (en) * 2009-05-05 2016-01-05 B.R.A.H.M.S Gmbh Vasoactive hormone-based stratification of patients suffering from diseases related to endothelial function/dysfunction
AU2010259022B2 (en) 2009-06-08 2016-05-12 Singulex, Inc. Highly sensitive biomarker panels
CN103328976B (zh) * 2010-11-01 2016-08-10 B.R.A.H.M.S有限公司 具有非特定主诉的患者的预后和风险评估
EP2637023A1 (de) * 2012-03-08 2013-09-11 B.R.A.H.M.S GmbH Vorhersage der Ergebnisse bei Patienten mit chronisch obstruktiver Lungenerkrankung
KR101531835B1 (ko) * 2013-10-16 2015-06-29 한국표준과학연구원 화학적 동위원소 치환법을 이용한 혈액 내 뇌성 나트륨 이뇨 펩타이드 질량분석법
CN106370856B (zh) * 2016-08-16 2019-04-02 北京师范大学 肺纤维化的尿液蛋白标志物及其在诊断和预后中的用途
US12001939B2 (en) 2018-12-11 2024-06-04 Eko.Ai Pte. Ltd. Artificial intelligence (AI)-based guidance for an ultrasound device to improve capture of echo image views
US11446009B2 (en) 2018-12-11 2022-09-20 Eko.Ai Pte. Ltd. Clinical workflow to diagnose heart disease based on cardiac biomarker measurements and AI recognition of 2D and doppler modality echocardiogram images
US11931207B2 (en) 2018-12-11 2024-03-19 Eko.Ai Pte. Ltd. Artificial intelligence (AI) recognition of echocardiogram images to enhance a mobile ultrasound device

Family Cites Families (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP3519139B2 (ja) * 1993-10-19 2004-04-12 武田薬品工業株式会社 エンドセリン拮抗阻害剤スクリーニング用キット及びスクリーニング方法
DE19847690A1 (de) * 1998-10-15 2000-04-20 Brahms Diagnostica Gmbh Verfahren und Substanzen für die Diagnose und Therapie von Sepsis und sepsisähnlichen systemischen Infektionen
IL145034A0 (en) * 1999-03-05 2002-06-30 Epigenesis Pharmaceuticals Inc Method for validating/invalidating target(s) and pathways
AUPR005600A0 (en) * 2000-09-12 2000-10-05 University Of Sydney, The Diagnostic assay
US7713705B2 (en) * 2002-12-24 2010-05-11 Biosite, Inc. Markers for differential diagnosis and methods of use thereof
AU2003299933B2 (en) * 2002-10-09 2010-06-24 Luoxis Diagnostics, Inc. Diagnosis and monitoring of inflammation, ischemia and appendicitis
CA2536293A1 (en) * 2003-08-22 2005-03-03 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating copd and pulmonary hypertension
ES2255003T3 (es) * 2004-02-13 2006-06-16 B.R.A.H.M.S Aktiengesellschaft Procedimiento para determinar la formacion de endotelinas con fines diagnostico medico, y anticuerpos y kits para realizar un procedimiento de este tipo.
US20050244839A1 (en) * 2004-04-29 2005-11-03 Cheung Siu T Granulin-epithelin precursor (GEP) overexpression as a target for diagnosis, prognosis and treatment of hepatocellular carcinoma (HCC)
ATE392623T1 (de) * 2004-07-22 2008-05-15 Brahms Ag Verfahren für die diagnose von schwerkranken patienten
DE102004051847B4 (de) * 2004-10-25 2008-09-18 Dade Behring Marburg Gmbh Verhältnis von PIGF und Flt-1 als prognostischer Parameter bei kardio-vaskulären Erkrankungen
MX2007009810A (es) * 2005-02-14 2008-03-07 Wyeth Corp Uso de interleucina-17f en diagnostico y terapia de inflamacion de vias aereas.
JP2006292623A (ja) * 2005-04-13 2006-10-26 Univ Of Dundee 心不全における突然死のマーカー
UA11822U (en) * 2005-06-21 2006-01-16 L T Malaia Inst Of Therapy Of Method for determining the risk of the development and progressing of chronic obstructive pulmonary disease
US20080221033A1 (en) * 2005-07-29 2008-09-11 Koninklijke Philips Electronics N. V. Monitoring of Cardiac Natriuretic Peptides During Diagnosis, Management, and Treatment of Cardiac Diseases
DE102006046996A1 (de) * 2006-10-01 2008-04-03 Brahms Aktiengesellschaft Diagnose von Infektionen oder Entzündungserkrankungen der Atemwege und Lunge assoziiert mit Herzinsuffizienz
DE102006060835A1 (de) * 2006-12-22 2008-06-26 Brahms Aktiengesellschaft Diagnose und Risikostratifizierung des akuten Koronarsyndroms mittels CT-proET-1 in Kombination mit NT-proBNP
DE102007021443A1 (de) * 2007-05-08 2008-11-13 Brahms Aktiengesellschaft Diagnose und Risikostratifizierung mittels NT-proET-1

Also Published As

Publication number Publication date
JP2015007653A (ja) 2015-01-15
ES2430218T3 (es) 2013-11-19
EP2147316A2 (de) 2010-01-27
CN104374926B (zh) 2017-05-17
ES2388055T3 (es) 2012-10-08
US9261516B2 (en) 2016-02-16
WO2008135038A2 (de) 2008-11-13
CN104374926A (zh) 2015-02-25
US20160161505A1 (en) 2016-06-09
HK1139733A1 (en) 2010-09-24
DE102007021443A1 (de) 2008-11-13
WO2008135038A3 (de) 2009-02-05
US20110039283A1 (en) 2011-02-17
JP2010526305A (ja) 2010-07-29
HK1203089A1 (en) 2015-10-16
EP2306203A1 (de) 2011-04-06
CN101688869B (zh) 2014-09-17
CN101688869A (zh) 2010-03-31
EP2147316B1 (de) 2013-07-10
JP5932924B2 (ja) 2016-06-08
JP5717442B2 (ja) 2015-05-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP2306203B1 (de) Diagnose und Risikostratifizierung mittels NT-proET-1
EP2111552B1 (de) Diagnose und risikostratifizierung mittels dem neuen marker ct-proadm
EP1488209B1 (de) Bestimmung eines midregionalen proadrenomedullin-teilpeptids in einer biologischen flüssigkeit zu diagnostischen zwecken sowie immunoassays für die durchführung einer solchen bestimmung
EP2084543B1 (de) Risikostratifizierung des akuten koronarsyndroms mittels fragmenten / teilpeptiden des provasopressins, insbesondere copeptin oder neurophysin ii
WO2008040328A2 (de) Diagnose von infektionen oder entzündungserkrankungen der atemwege und lunge assoziiert mit herzinsuffizienz
EP2122365B1 (de) Diagnose und risikostratifizierung des akuten koronarsyndroms mittels ct-proet-1 in kombination mit nt-probnp
JP2010526305A5 (de)
DE102007009751A1 (de) Verfahren zur selektiven Bestimmung von Procalcitonin 1-116 für diagnostische Zwecke sowie Antikörper und Kits zur Durchführung eines solchen Verfahrens
EP1562984B1 (de) Sandwich-immunoassay zur bestimmung von proanp-teilpeptiden
EP2378290B1 (de) Diagnose und Risikostratifizierung von Infektionen und chronischen Erkrankungen der Atemwege und Lungen mittels Pro-Vasopressin, insbesondere Copeptin oder Neurophysin II
EP1493034B1 (de) Verfahren zur diagnose von entzündungserkrankungen und infektionen mittels bestimmung von lasp-1/ lap-1
DE102006050497A1 (de) Risikostratifizierung des akuten Koronarsyndroms mittels Fragmenten / Teilpeptiden des proVasopressins, insbesondere Copeptin oder Neurophysin II
DE102006057409A1 (de) Risikostratifizierung des akuten Koronarsyndroms mittels Fragmenten / Teilpeptiden des proVasopressins, insbesondere Copeptin oder Neurophysin II

Legal Events

Date Code Title Description
PUAI Public reference made under article 153(3) epc to a published international application that has entered the european phase

Free format text: ORIGINAL CODE: 0009012

AC Divisional application: reference to earlier application

Ref document number: 2147316

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: P

AK Designated contracting states

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HR HU IE IS IT LI LT LU LV MC MT NL NO PL PT RO SE SI SK TR

17P Request for examination filed

Effective date: 20111006

GRAP Despatch of communication of intention to grant a patent

Free format text: ORIGINAL CODE: EPIDOSNIGR1

GRAS Grant fee paid

Free format text: ORIGINAL CODE: EPIDOSNIGR3

GRAA (expected) grant

Free format text: ORIGINAL CODE: 0009210

AC Divisional application: reference to earlier application

Ref document number: 2147316

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: P

AK Designated contracting states

Kind code of ref document: B1

Designated state(s): AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HR HU IE IS IT LI LT LU LV MC MT NL NO PL PT RO SE SI SK TR

REG Reference to a national code

Ref country code: GB

Ref legal event code: FG4D

Free format text: NOT ENGLISH

REG Reference to a national code

Ref country code: CH

Ref legal event code: EP

REG Reference to a national code

Ref country code: AT

Ref legal event code: REF

Ref document number: 566390

Country of ref document: AT

Kind code of ref document: T

Effective date: 20120715

REG Reference to a national code

Ref country code: IE

Ref legal event code: FG4D

Free format text: LANGUAGE OF EP DOCUMENT: GERMAN

REG Reference to a national code

Ref country code: DE

Ref legal event code: R096

Ref document number: 502008007715

Country of ref document: DE

Effective date: 20120906

REG Reference to a national code

Ref country code: ES

Ref legal event code: FG2A

Ref document number: 2388055

Country of ref document: ES

Kind code of ref document: T3

Effective date: 20121008

REG Reference to a national code

Ref country code: CH

Ref legal event code: NV

Representative=s name: PATENTANWAELTE SCHAAD, BALASS, MENZL & PARTNER AG

REG Reference to a national code

Ref country code: NL

Ref legal event code: VDEP

Effective date: 20120711

REG Reference to a national code

Ref country code: LT

Ref legal event code: MG4D

Effective date: 20120718

PG25 Lapsed in a contracting state [announced via postgrant information from national office to epo]

Ref country code: FI

Free format text: LAPSE BECAUSE OF FAILURE TO SUBMIT A TRANSLATION OF THE DESCRIPTION OR TO PAY THE FEE WITHIN THE PRESCRIBED TIME-LIMIT

Effective date: 20120711

Ref country code: HR

Free format text: LAPSE BECAUSE OF FAILURE TO SUBMIT A TRANSLATION OF THE DESCRIPTION OR TO PAY THE FEE WITHIN THE PRESCRIBED TIME-LIMIT

Effective date: 20120711

Ref country code: CY

Free format text: LAPSE BECAUSE OF FAILURE TO SUBMIT A TRANSLATION OF THE DESCRIPTION OR TO PAY THE FEE WITHIN THE PRESCRIBED TIME-LIMIT

Effective date: 20120711

Ref country code: LT

Free format text: LAPSE BECAUSE OF FAILURE TO SUBMIT A TRANSLATION OF THE DESCRIPTION OR TO PAY THE FEE WITHIN THE PRESCRIBED TIME-LIMIT

Effective date: 20120711

Ref country code: IS

Free format text: LAPSE BECAUSE OF FAILURE TO SUBMIT A TRANSLATION OF THE DESCRIPTION OR TO PAY THE FEE WITHIN THE PRESCRIBED TIME-LIMIT

Effective date: 20121111

Ref country code: NO

Free format text: LAPSE BECAUSE OF FAILURE TO SUBMIT A TRANSLATION OF THE DESCRIPTION OR TO PAY THE FEE WITHIN THE PRESCRIBED TIME-LIMIT

Effective date: 20121011

PG25 Lapsed in a contracting state [announced via postgrant information from national office to epo]

Ref country code: PT

Free format text: LAPSE BECAUSE OF FAILURE TO SUBMIT A TRANSLATION OF THE DESCRIPTION OR TO PAY THE FEE WITHIN THE PRESCRIBED TIME-LIMIT

Effective date: 20121112

Ref country code: GR

Free format text: LAPSE BECAUSE OF FAILURE TO SUBMIT A TRANSLATION OF THE DESCRIPTION OR TO PAY THE FEE WITHIN THE PRESCRIBED TIME-LIMIT

Effective date: 20121012

Ref country code: SI

Free format text: LAPSE BECAUSE OF FAILURE TO SUBMIT A TRANSLATION OF THE DESCRIPTION OR TO PAY THE FEE WITHIN THE PRESCRIBED TIME-LIMIT

Effective date: 20120711

Ref country code: PL

Free format text: LAPSE BECAUSE OF FAILURE TO SUBMIT A TRANSLATION OF THE DESCRIPTION OR TO PAY THE FEE WITHIN THE PRESCRIBED TIME-LIMIT

Effective date: 20120711

Ref country code: SE

Free format text: LAPSE BECAUSE OF FAILURE TO SUBMIT A TRANSLATION OF THE DESCRIPTION OR TO PAY THE FEE WITHIN THE PRESCRIBED TIME-LIMIT

Effective date: 20120711

Ref country code: LV

Free format text: LAPSE BECAUSE OF FAILURE TO SUBMIT A TRANSLATION OF THE DESCRIPTION OR TO PAY THE FEE WITHIN THE PRESCRIBED TIME-LIMIT

Effective date: 20120711

PG25 Lapsed in a contracting state [announced via postgrant information from national office to epo]

Ref country code: NL

Free format text: LAPSE BECAUSE OF FAILURE TO SUBMIT A TRANSLATION OF THE DESCRIPTION OR TO PAY THE FEE WITHIN THE PRESCRIBED TIME-LIMIT

Effective date: 20120711

PG25 Lapsed in a contracting state [announced via postgrant information from national office to epo]

Ref country code: CZ

Free format text: LAPSE BECAUSE OF FAILURE TO SUBMIT A TRANSLATION OF THE DESCRIPTION OR TO PAY THE FEE WITHIN THE PRESCRIBED TIME-LIMIT

Effective date: 20120711

Ref country code: DK

Free format text: LAPSE BECAUSE OF FAILURE TO SUBMIT A TRANSLATION OF THE DESCRIPTION OR TO PAY THE FEE WITHIN THE PRESCRIBED TIME-LIMIT

Effective date: 20120711

Ref country code: EE

Free format text: LAPSE BECAUSE OF FAILURE TO SUBMIT A TRANSLATION OF THE DESCRIPTION OR TO PAY THE FEE WITHIN THE PRESCRIBED TIME-LIMIT

Effective date: 20120711

Ref country code: RO

Free format text: LAPSE BECAUSE OF FAILURE TO SUBMIT A TRANSLATION OF THE DESCRIPTION OR TO PAY THE FEE WITHIN THE PRESCRIBED TIME-LIMIT

Effective date: 20120711

PLBE No opposition filed within time limit

Free format text: ORIGINAL CODE: 0009261

STAA Information on the status of an ep patent application or granted ep patent

Free format text: STATUS: NO OPPOSITION FILED WITHIN TIME LIMIT

PG25 Lapsed in a contracting state [announced via postgrant information from national office to epo]

Ref country code: SK

Free format text: LAPSE BECAUSE OF FAILURE TO SUBMIT A TRANSLATION OF THE DESCRIPTION OR TO PAY THE FEE WITHIN THE PRESCRIBED TIME-LIMIT

Effective date: 20120711

26N No opposition filed

Effective date: 20130412

PG25 Lapsed in a contracting state [announced via postgrant information from national office to epo]

Ref country code: BG

Free format text: LAPSE BECAUSE OF FAILURE TO SUBMIT A TRANSLATION OF THE DESCRIPTION OR TO PAY THE FEE WITHIN THE PRESCRIBED TIME-LIMIT

Effective date: 20121011

REG Reference to a national code

Ref country code: DE

Ref legal event code: R097

Ref document number: 502008007715

Country of ref document: DE

Effective date: 20130412

PG25 Lapsed in a contracting state [announced via postgrant information from national office to epo]

Ref country code: MC

Free format text: LAPSE BECAUSE OF FAILURE TO SUBMIT A TRANSLATION OF THE DESCRIPTION OR TO PAY THE FEE WITHIN THE PRESCRIBED TIME-LIMIT

Effective date: 20120711

REG Reference to a national code

Ref country code: IE

Ref legal event code: MM4A

PG25 Lapsed in a contracting state [announced via postgrant information from national office to epo]

Ref country code: IE

Free format text: LAPSE BECAUSE OF NON-PAYMENT OF DUE FEES

Effective date: 20130508

PG25 Lapsed in a contracting state [announced via postgrant information from national office to epo]

Ref country code: MT

Free format text: LAPSE BECAUSE OF FAILURE TO SUBMIT A TRANSLATION OF THE DESCRIPTION OR TO PAY THE FEE WITHIN THE PRESCRIBED TIME-LIMIT

Effective date: 20120711

PG25 Lapsed in a contracting state [announced via postgrant information from national office to epo]

Ref country code: LU

Free format text: LAPSE BECAUSE OF NON-PAYMENT OF DUE FEES

Effective date: 20130508

Ref country code: HU

Free format text: LAPSE BECAUSE OF FAILURE TO SUBMIT A TRANSLATION OF THE DESCRIPTION OR TO PAY THE FEE WITHIN THE PRESCRIBED TIME-LIMIT; INVALID AB INITIO

Effective date: 20080508

REG Reference to a national code

Ref country code: FR

Ref legal event code: PLFP

Year of fee payment: 9

REG Reference to a national code

Ref country code: FR

Ref legal event code: PLFP

Year of fee payment: 10

REG Reference to a national code

Ref country code: FR

Ref legal event code: PLFP

Year of fee payment: 11

PGFP Annual fee paid to national office [announced via postgrant information from national office to epo]

Ref country code: ES

Payment date: 20180601

Year of fee payment: 11

PGFP Annual fee paid to national office [announced via postgrant information from national office to epo]

Ref country code: BE

Payment date: 20180417

Year of fee payment: 11

PGFP Annual fee paid to national office [announced via postgrant information from national office to epo]

Ref country code: GB

Payment date: 20180502

Year of fee payment: 11

GBPC Gb: european patent ceased through non-payment of renewal fee

Effective date: 20190508

REG Reference to a national code

Ref country code: BE

Ref legal event code: MM

Effective date: 20190531

PG25 Lapsed in a contracting state [announced via postgrant information from national office to epo]

Ref country code: IT

Free format text: LAPSE BECAUSE OF NON-PAYMENT OF DUE FEES

Effective date: 20190508

Ref country code: GB

Free format text: LAPSE BECAUSE OF NON-PAYMENT OF DUE FEES

Effective date: 20190508

PG25 Lapsed in a contracting state [announced via postgrant information from national office to epo]

Ref country code: BE

Free format text: LAPSE BECAUSE OF NON-PAYMENT OF DUE FEES

Effective date: 20190531

REG Reference to a national code

Ref country code: ES

Ref legal event code: FD2A

Effective date: 20200925

PG25 Lapsed in a contracting state [announced via postgrant information from national office to epo]

Ref country code: ES

Free format text: LAPSE BECAUSE OF NON-PAYMENT OF DUE FEES

Effective date: 20190509

PG25 Lapsed in a contracting state [announced via postgrant information from national office to epo]

Ref country code: TR

Free format text: LAPSE BECAUSE OF NON-PAYMENT OF DUE FEES

Effective date: 20190508

P01 Opt-out of the competence of the unified patent court (upc) registered

Effective date: 20230524

PGFP Annual fee paid to national office [announced via postgrant information from national office to epo]

Ref country code: AT

Payment date: 20230526

Year of fee payment: 16

PGFP Annual fee paid to national office [announced via postgrant information from national office to epo]

Ref country code: DE

Payment date: 20240430

Year of fee payment: 17

PGFP Annual fee paid to national office [announced via postgrant information from national office to epo]

Ref country code: CH

Payment date: 20240602

Year of fee payment: 17

PGFP Annual fee paid to national office [announced via postgrant information from national office to epo]

Ref country code: FR

Payment date: 20240524

Year of fee payment: 17

REG Reference to a national code

Ref country code: AT

Ref legal event code: MM01

Ref document number: 566390

Country of ref document: AT

Kind code of ref document: T

Effective date: 20240508

PG25 Lapsed in a contracting state [announced via postgrant information from national office to epo]

Ref country code: AT

Free format text: LAPSE BECAUSE OF NON-PAYMENT OF DUE FEES

Effective date: 20240508

PG25 Lapsed in a contracting state [announced via postgrant information from national office to epo]

Ref country code: AT

Free format text: LAPSE BECAUSE OF NON-PAYMENT OF DUE FEES

Effective date: 20240508

OSZAR »